Om Quattrocento präglades av ett flertal konstnärliga centra, i spetsen för den florentinska "stora verkstaden", blev Rom under nästa århundrade det viktigaste centrumet. Samtidigt utvecklas ett annat konstcentrum som i framtiden kommer att bli mycket inflytelserikt: Venedig.
Men under de första tjugo åren av Cinquecento var Florens fortfarande konstens huvudstad. Det var där som Raphael arbetade, som kom för att studera Leonardo, Michelangelos och Fra Bartolommeos arbete, liksom för att förstå subtiliteterna i anatomi, tekniken för ljus och sentimental uttryck. Under sin vistelse i Florens målade han många Madonnas, inklusive en vacker trädgårdsmästare full av ömhet. Han påkallades till Rom av påven Julius II 1508 och fick en order att måla de personliga påvliga rummen (stroferna) i Vatikanpalatset, vilket var början på hans intensiva arbete i heliga stolens tjänst.
Förutom dessa verk, för vilka han skapar sin egen verkstad, är konstnären engagerad i staffelmålning, i synnerhet skriver han St. Michael, beställd av Lorenzo Medici som en gåva till Francis I. Idag är denna målning en del av Louvresamlingen, liksom en annan - en liten - St. Michael och St. George, troligen skriven för hertigen av Montefeltre.
Raphaels penslar tillhör dessutom flera påfallande sanna porträtt, till exempel porträttet av Baldassare Castiglione. I tre århundraden var Raphaels arbete extremt populärt, även i Frankrike. Skapandet av legenden kring hans namn underlättades delvis av befälhavarens plötsliga död vid trettiosju års ålder.
